Секвенирование фрагмента гена BCR-ABL (определение резистентности к Иматинибу)

Что такое хронический миелолейкоз?

Хронический миелолейкоз является наиболее часто встречающейся разновидностью миелопролиферативного заболевания. При хроническом миелоидном лейкозе происходит повышенное образование малодифференцированных гранулоцитов - предшественников миелопоэза. Данное заболевание чаще возникает у взрослых, но около 2 % случаев приходится на долю детей.

Механизм развития хронического миелолейкоза

В абсолютном большинстве случаев причиной возникновения хронического миелолейкоза является появление в клетках костного мозга «филадельфийской хромосомы» (Ph-позитивный хронический миелолейкоз).

«Филадельфийская хромосома» возникает в результате обмена генетическим материалом между 9 и 22 хромосомами. В результате переноса генетического материала с 9 на 22 хромосому на последней образуется слитный ген BCR-ABL, продукт которого - белок р210 - является тирозинкиназой с повышенной активностью.

Эта тирозинкиназа участвует в регуляции сигнальных путей, ответственных за клеточный рост, активацию, дифференцировку, адгезию и апоптоз. Появление p210 тирозинкиназы в гемопоэтических предшественниках приводит к нарушению нормального функционирования клетки и ее злокачественной трансформации.

Со временем клетки, содержащие патологический белок р210, вытесняют нормальные стволовые клетки, и у больного развивается клинико-гематологическая картина хронического миелолейкоза.

Почему необходимо пройти обследование?

В клиническом течении заболевания выделяют 3 фазы: хроническую, акселерации и терминальную (бластная трансформация, или бластный криз).

Впервые заболевание может быть выявлено на любой стадии, но наиболее часто (приблизительно в 85% случаев) диагноз устанавливается в хронической фазе.

Учитывая трудности проведения дифференциального диагноза с миелопролиферативными заболеваниями и необходимость раннего проведения специфической терапии, следует подчеркнуть, что диагноз хронический миелоидный лейкоз окончательно может быть верифицирован с помощью молекулярно-генетических методов обнаружения BCR-ABL транскрипта.

Определение «филадельфийской хромосомы» в настоящее время является не только диагностическим инструментом, но и фактором, определяющим стратегию и тактику дальнейшей терапии больных хроническим миелолейкозом, особенно при мониторинге минимальной остаточной болезни.

Что такое Иматиниб?

Новым стандартом терапии Ph-позитивного хронического миелолейкоза является применение Иматиниба - селективного ингибитора BCR-ABL тирозинкиназы.

Лечение Иматинибом пациентов в хронической фазе Ph-позитивного хронического миелолейкоза приводит к достижению гематологической и цитогенетической ремиссии с высокой частотой.

Однако у некоторых пациентов наблюдается первичная или приобретенная резистентность к иматинибу.

Механизмы развития резистентности различны, но наиболее частой причиной резистентности к Иматинибу являются точечные мутации гена BCR-ABL, приводящие к замене аминокислот в белке, что нарушает связывание Иматиниба с белком и снижает эффективность препарата.

В настоящее время идентифицировано, по крайней мере, 90 точечных мутаций киназного домена гена BCR-ABL, каждая из которых приводит к замене одной из 53 аминокислот в белке BCR-ABL тирозинкиназы и обусловливает резистентность к Иматинибу.

Когда следует провести анализ на наличие мутаций?

Вероятность появления мутаций, а следовательно, и ухудшение прогноза заболевания увеличиваются по мере его прогрессирования. В этой связи поиск мутаций гена BCR-ABL на момент постановки диагноза хронического миелолейкоза представляется нецелесообразным. Даже если перед началом лечения будет выявлен клон клеток, имеющих мутацию гена BCR-ABL, этот клон не обязательно будет прогрессировать на фоне терапии Иматинибом. Следовательно, мутационный анализ на данной стадии заболевания не имеет клинического значения.

Если в процессе лечения обнаружена гематологическая или цитогенетическая рефрактерность к Иматинибу (первичная резистентность), либо потеря уже достигнутого гематологического, цитогенетического или молекулярного ответа (приобретенная резистентность), то любое из этих состояний пациента является показанием для анализа мутаций киназного домена гена BCR-ABL.

Почему необходимо пройти обследование?

Обнаружение мутаций киназного домена гена BCR-ABL позволяет рационализировать тактику терапии хронического миелолейкоза: повысить дозу Иматиниба, перейти на терапию ингибиторами тирозинкиназ II поколения (Нилотиниб, Дазатиниб), рекомендовать экспериментальную терапию либо трансплантацию костного мозга.

Методы выявления мутаций

В мутационном анализе необходимо использовать методические подходы, позволяющие выявлять доминирующие мутантные клоны. Высокочувствительные методы детекции мутаций (например, ПЦР в режиме реального времени) могут выявлять низкопроцентные мутантные клоны, не влияющие на течение заболевания. С этой точки зрения наиболее приемлемым является метод прямого секвенирования ДНК, позволяющий расшифровать первичную структуру гена BCR-ABL.

Материал для исследования

Материалом для проведения данного анализа служат клетки периферической крови или клетки пунктата костного мозга.

Где можно пройти процедуру?

1. Физические лица, пациенты  и т.д.:

Процедуру забора крови и проведения анализа можно пройти в медицинском отделении ООО "Биолинк"  Медицинском Центре "СТАТУС". Проконсультироваться и записаться на прием можно по сервисному телефону центра (383) 248-90-09  Понед.- Птн. с 9.00 до 20.00; Суббота: с 9.00 до 14.00.

2. Юридические лица:

Для получения более подробной информации о возможностях работы с юридическими лицами свяжитесь с нами  наиболее удобным для Вас способом тел./факс  (383) 334-86-14б e-mail: info [at] biolinklab [dot] ru